在利用CRISPR/Cas9进行基因功能研究和种质创制时,传统的策略是靶向基因的编码区(CDS),通过移码突变来实现“敲除”。然而,西部(重庆)科学城种质创制大科学中心王德寿教授团队在《Aquaculture Reports》(2025)上发表的研究发现一个更高效的策略:靶向基因的剪接位点。

研究发现,传统CRISPR/Cas9在靶向编码区时,常因非移码突变的存在导致敲除效果不佳。而团队设计的剪接位点靶向策略,通过在内含子-外显子交界处引入突变,使基因转录产物发生异常剪接,从而实现更高效的基因功能丧失。在罗非鱼模型中,该策略相较传统策略有效突变率和表型率在F0代大幅度提高,且有30%的个体获得接近纯合突变的表型。
这项研究为基因功能研究,特别是对于性成熟周期长、难以快速获得纯合突变体的重要养殖鱼类(如鲟鱼、鲑鱼、鲤鱼等),提供了一种在F0代就能高效获得显著突变表型的新策略,极大地加速了育种和基因解析进程。研究成果《Splice-site mutation enhances the efficiency of CRISPR-mediated gene knockout and new germplasm creation in fish》于2025年12月在《Aquaculture Reports》在线发表。西部(重庆)科学城种质创制大科学中心博士研究生徐震为论文第一作者,教授王德寿、陶文静为通讯作者。研究得到了国家基础研究计划项目(2022YFD1201600)、国家自然科学基金项目(32373106、32172953、U24A20455)、生物育种国家科技重大专项(2023ZD0406805)和重庆市渔业技术创新联盟项目(CQFTIU202501–7)的资助。
论文链接:https://doi.org/10.1016/j.aqrep.2025.102995